產(chǎn)品詳情介紹
本產(chǎn)品用于對(duì)各類生物制品中的畢赤酵母DNA進(jìn)行定量檢測(cè)。
本產(chǎn)品原理為利用在PCR體系中加入熒光探針 (TaqMan或Molecular Beacon等)，擴(kuò)增過程中其熒光量與擴(kuò)增產(chǎn)物量成正比，通過熒光量的檢測(cè)測(cè)定樣品核酸量。本產(chǎn)品中的Pichia qPCR SuperMix (2×)含PerfectStart Taq熱啟動(dòng)酶 (利用3種單克隆抗體與Taq DNA Polymerase高效結(jié)合，有效地封閉了DNA聚合酶活性，阻止了低溫下的非特異性擴(kuò)增)、針對(duì)畢赤酵母DNA檢測(cè)特殊優(yōu)化的qPCR反應(yīng)緩沖液、dNTPs、PCR增強(qiáng)劑、穩(wěn)定劑。此外，本反應(yīng)液引入了dUTP/UDG系統(tǒng)，可在反轉(zhuǎn)錄前降解含U的ssDNA和dsDNA，消除由PCR產(chǎn)物導(dǎo)致的交叉污染。
線性范圍廣
以10倍梯度稀釋的 Pichia DNA標(biāo)準(zhǔn)品為模板，使用 TransGen 產(chǎn)品進(jìn)行定量檢測(cè)。結(jié)果表明，TransGen 產(chǎn)品具有寬廣的線性范圍。
專屬性強(qiáng)
使用生物制品生產(chǎn)中常用的工程細(xì)胞基因組DNA對(duì)Pichia檢測(cè)試劑進(jìn)行干擾。結(jié)果表明，干擾組與對(duì)照組重合，未見干擾。
定量限低
檢測(cè)30 fg/μl，15 fg/μl，10 fg/μl，3 fg/μl Pichia 標(biāo)準(zhǔn)品。10 fg/μl及以上濃度10個(gè)重復(fù)孔的CV值<20%（參考中國(guó)藥典（2015年版）：生物樣品定量分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則），即本試劑盒的定量限為10 fg/μl。
耐用性強(qiáng)
將不同超聲條件處理后的 Pichia 細(xì)胞基因組DNA 進(jìn)行10倍梯度稀釋(300 pg/μl - 30 fg/μl)并進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明，DNA的碎片化不會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成影響。
穩(wěn)定性強(qiáng)
不同溫度保存
以10倍梯度稀釋(300 pg/μl - 30 fg/μl)的 Pichia 宿主細(xì)胞DNA標(biāo)準(zhǔn)品為模板， 使用經(jīng)不同保存條件處理（4 ℃、室溫、37 ℃保存8天， - 20 ℃正常保存）的TransGen 產(chǎn)品進(jìn)行檢測(cè)， 結(jié)果表明，產(chǎn)品性能不受影響，仍可穩(wěn)定擴(kuò)增。
反復(fù)凍融測(cè)試
以10倍梯度稀釋(300 pg/μl - 30 fg/μl)的 Pichia DNA標(biāo)準(zhǔn)品為模板，使用經(jīng)反復(fù)凍融處理的TransGen 產(chǎn)品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明，產(chǎn)品性能不受影響，仍可穩(wěn)定擴(kuò)增。
