熒光標記抗體系列
流式細胞術（Flow CytoMetry，F(xiàn)CM）是根據(jù)單個細胞不同形態(tài)、表面標志物、內(nèi)容物的差異，利用流式細胞儀檢測細胞固有的或特異性標記的信號，從而實現(xiàn)細胞分析與細胞分選目的的一種方法。經(jīng)過近五十年的發(fā)展和完善，流式細胞術技術已經(jīng)十分成熟，并被廣泛的運用于從基礎研究到臨床實踐的各個方面，涵蓋了細胞生物學、免疫學、血液學、腫瘤學、藥理學、遺傳學及臨床檢驗等領域，在各學科中發(fā)揮著重要的作用。
隨著流式細胞術應用領域的日益廣泛，熒光標記產(chǎn)品的種類、數(shù)量也在不斷增多，加上多色分析實驗方案需求的增長，熒光標記抗體如何選擇，也成為了流式技術是否能被成功應用的關鍵因素之一。
? 熒光標記抗體
抗體是機體組織在感受到特定外來物質(zhì)時由漿細胞（效應B細胞）分泌、被免疫系統(tǒng)用來鑒別及中和外來物質(zhì)如細菌、病毒等的蛋白質(zhì)。而熒光抗體標記技術是將熒光素以化學方法與特異性抗體共價結(jié)合，形成熒光素-蛋白質(zhì)結(jié)合物（即熒光標記抗體），此結(jié)合物仍保留著抗體活性，同時具有熒光素的示蹤作用。
注：圖片來源于網(wǎng)絡
? 抗體熒光標記的選擇
1. 如果實驗中檢測單一指標：
不同熒光標記在不同的儀器上強度不同。以FACS Calibur儀器為例：PE＞APC＞PE-Cy5＞PerCP-Cy5.5＞FITC＞PerCP，通常來說，PE最強，適用于弱表達抗原。FITC強度較弱，適用于強表達抗原。使用時需根據(jù)檢測的目標蛋白進行具體選擇。
2. 如果同時檢測多個指標：
確認流式細胞儀能檢測多少個通道：流式抗體每個通道只能選擇一種熒光素，且各個通道之間的熒光素可以隨意搭配。
3. 常用熒光標記：
FITC、PE、APC、PerCP-Cy5.5等。
? 抗體熒光標記的方式
抗體熒光標記的方式包括直接標記和間接標記兩種。在流式實驗過程中，盡量減少實驗工序和過程，以保證實驗的真實和準確性。因此在條件允許的范圍內(nèi)，盡量用直接標記的抗體進行實驗而不去做間接標記。
? 熒光標記抗體的應用
熒光標記抗體目前主要應用于癌癥，免疫學，心血管，外泌體，神經(jīng)科學，發(fā)育生物學，MSC，細胞周期、細胞凋亡、細胞增殖/活力研究，細胞信號轉(zhuǎn)導，新陳代謝，臨床診斷等領域的研究，典型應用為MSC鑒定和免疫學流式分析等。
1. MSC表面標志物：
國際細胞治療學會 (ISCT) 認定，MSC細胞表達CD73、CD90 與 CD105，不表達CD11b、CD14、CD19、CD34、CD45、CD79a與HLA-DR，其中CD73、CD90 、CD105、CD45為MSC必檢標志物。
2. T淋巴細胞表面標志物：
CD3、CD4、CD8與CD45等。
為更好的滿足廣大客戶對流式抗體的應用需求，全式金自主研發(fā)了多款帶有不同熒光標記的直標流式抗體，可應用于MSC鑒定和免疫學分析，能夠快速高效地進行細胞表面不同標志物的流式檢測。
應用領域-MSC鑒定
? CD73
CD73蛋白分子量約為70 kD，通常由兩個相同的亞基通過糖基磷脂酰肌醇(GPI)錨定在細胞表面形成同源二聚體，可將單磷酸腺苷(AMP)水解為腺苷。CD73作為淋巴細胞分化的標志，在一些免疫缺陷病中表達減弱。據(jù)研究報道，CD73是一種潛在的生物標志物，其高表達與多種類型腫瘤的不良預后密切相關。
? Anti-Human CD73，F(xiàn)ITC (HF101)
? Anti-Human CD73，PE (HF102)
? Anti-Human CD73，APC (HF104)
該產(chǎn)品通過親和層析純化CD73單克隆抗體后，在最佳條件下與熒光素FITC、PE、APC偶聯(lián)制得，用于細胞表面CD73抗原的流式檢測。
◇ 明顯區(qū)分陽性和陰性細胞群
? CD105
CD105又稱為內(nèi)皮糖蛋白（Endoglin），是位于細胞表面的I型跨膜蛋白，由同源二聚體組成，分子量約為90 kD。CD105是TGF-β受體復合物之一，高度結(jié)合TGF-β1和β3，但與β2不結(jié)合。CD105在血管內(nèi)皮細胞中高度表達，是腫瘤血管生成的標志性分子。
? Anti-Human CD105，PE (HF112)
? Anti-Human CD105，APC (HF114)
該產(chǎn)品通過親和層析純化CD105單克隆抗體后，在最佳條件下與熒光素PE、APC偶聯(lián)制得，用于細胞表面CD105抗原的流式檢測。
? CD90
CD90又稱為Thy 1，是一種分子量為25-37 kD的糖蛋白，通過糖基磷脂酰肌醇 (GPI) 錨定在細胞膜表面，屬于免疫球蛋白超家族。CD90是微血管內(nèi)皮細胞活化的標志，與新生血管形成有關，也是鑒別MSC的重要標志之一。CD90與β2和β3整合素結(jié)合，參與細胞粘附的調(diào)控。
? Anti-Human CD90，APC (HF134)
該產(chǎn)品通過親和層析純化人CD90單克隆抗體后，在最佳條件下與熒光素APC偶聯(lián)制得，用于細胞表面CD90抗原的流式檢測。
? CD45
CD45，也被稱為白細胞共同抗原 (LCA) 或蛋白酪氨酸磷酸酶受體C (PTPRC)，由一類結(jié)構(gòu)相似，分子量在180-240 kDa之間的單鏈I型跨膜糖蛋白組成。CD45是一種酪氨酸磷酸酶，通過使包括p56Lck、p59Fyn和其它Src 家族激酶在內(nèi)的底物去磷酸化，在T和B細胞抗原受體介導的激活中起關鍵作用。此外，CD45是細胞膜上信號傳導的關鍵分子，在淋巴細胞的發(fā)育成熟、功能調(diào)節(jié)及信號傳遞中具有重要意義。
? Anti-Human CD45，F(xiàn)ITC (HF121)
?Anti-Human CD45，PerCP-Cy5.5 (HF125)
該產(chǎn)品通過親和層析純化CD45單克隆抗體后，在最佳條件下與熒光素FITC、PerCP-Cy5.5偶聯(lián)制得，用于細胞表面CD45抗原的流式檢測。
◇ CD45在MSC細胞表面不表達；在PBMC細胞表面強表達，用CD45-FITC、CD45-PerCP-Cy5.5分別標記后，可明顯區(qū)分陽性和陰性細胞群。
? 多色流式抗體共染
? Human MSC Characterization Kit (HF001)
該產(chǎn)品專門用于人MSC表面標志物的流式檢測和鑒定，包含三種用于鑒定人MSC的熒光標記抗體，以及一種用于鑒定非MSC的熒光標記抗體。通過流式檢測，MSC表達陽性標志物CD73、CD90和CD105的比例≥ 95%，同時表達陰性標志物CD45的比例≤ 2%。
◇ 產(chǎn)品特點
? 采用多色流式抗體共染，包含CD73+、CD90+、CD105+、CD45-共4種抗體。
? 最大限度減少檢測所需細胞量。
? 特異性強且操作簡便，適用于各種來源MSC的鑒定。
◇ 人臍帶來源MSC鑒定，其中CD73、CD90和CD105表達比例≥ 95%，CD45表達比例≤ 2%。
應用領域-免疫學流式分析
? CD3
CD3，是由五條肽鏈（CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD3η、CD3ζ）組成的蛋白復合物，屬于免疫球蛋白超家族的一員。CD3分子與T細胞受體(TCR)結(jié)合，共同參與T細胞對抗原的識別、信號轉(zhuǎn)導以及T細胞的活化。該CD3單克隆抗體特異性識別CD3/TCR復合物中的CD3ε鏈，可用于T細胞的激活和擴增。
? Anti-Human CD3，F(xiàn)ITC (HF151)
? Anti-Human CD3，PE (HF152)
? Anti-Human CD3，APC (HF154)
該產(chǎn)品通過親和層析純化CD3單克隆抗體后，在最佳條件下與熒光素FITC、PE、APC偶聯(lián)制得，用于細胞表面CD3抗原的流式檢測。
? CD4
CD4，是一種55 kDa的單鏈I型跨膜糖蛋白，為T細胞受體（TCR）識別抗原的共受體，與MHCⅡ類分子的非多肽區(qū)結(jié)合，參與T細胞TCR識別抗原的信號轉(zhuǎn)導。CD4也是HIV的主要受體。在巨噬細胞或NKT細胞中，CD4在TCR/LCK不依賴信號通路中，調(diào)控細胞的分化、激活、細胞因子表達和細胞遷移。
? Anti-Human CD4，F(xiàn)ITC (HF141)
?Anti-Human CD4，PE (HF142)
? Anti-Human CD4，APC (HF144)
該產(chǎn)品通過親和層析純化CD4單克隆抗體后，在最佳條件下與熒光素FITC、PE、APC偶聯(lián)制得，主要應用于細胞表面CD4抗原的檢測。
◇ 明顯區(qū)分陽性和陰性細胞群
◇ 不同熒光標記的抗體混合染色后，分離效果較好，特異性強。
熒光標記抗體產(chǎn)品信息
