Q:電泳條帶模糊?
A:
? 電泳緩沖液緩沖能力差。 電泳緩沖液多次使用后,離子強(qiáng)度降低,pH值上升,緩沖性能下降,可使DNA電泳產(chǎn)生條帶模糊和不規(guī)則的DNA條帶遷移的現(xiàn)象。
? 電壓過高,電泳時間過長。電泳時電壓不應(yīng)該超過20 V/cm,電泳溫度應(yīng)該低于30℃。如果電泳時電壓和溫度過高,可能導(dǎo)致出現(xiàn)條帶模糊和不規(guī)則的DNA條帶遷移的現(xiàn)象。特別是電壓太高易出現(xiàn)缺帶現(xiàn)象。電泳過程中由于會產(chǎn)熱,因此電泳時間長容易發(fā)生條帶模糊,特別是小片段會變得模糊。
? 凝膠放置時間太長或瓊脂糖的質(zhì)量差,導(dǎo)致DNA 條帶分辨率降低。
Q:DNA Marker 降解?
A:污染了核酸外切酶。建議用滅菌的槍頭,用后及時將管蓋擰緊。點樣時勿將電泳緩沖液帶入管中,建議更換槍頭。
Q:用EB瓊脂糖膠電泳不同時間會出現(xiàn)條帶亮度變化?
A:由于電泳過程中條帶與EB泳動方向相反,結(jié)合EB的量會隨時間變化,因此電泳后條帶亮度會發(fā)生變化。因此建議使用EB染膠實現(xiàn)精準(zhǔn)定量。
Q:DNA Marker電泳條帶分離效果不好?
A:瓊脂糖制膠濃度不合適,導(dǎo)致分辨率降低。制膠不均勻有時也會導(dǎo)致電泳異常。建議使用新制備的凝膠,制膠時注意操作中帶來的濃度誤差。一般對于大分子量片段,低濃度膠分離效果好;對于小分子量片段,高濃度膠分離效果好。
Q:不同核酸染料對DNA Marker 遷移率的影響?
A:預(yù)加GeneFinder、GelStain、GoldView到DNA Marker中,對Marker的遷移率都有一定的影響。